www.borelioza-forum.pl

Fałszywie ujemne wyniki testów serologicznych w kierunku Borrelia burgdorferi jako efekt kompleksemii w przebiegu choroby z Lyme

Problem seronegatywności, jeśli chodzi o obecność swoistych przeciwciał dla Borrelia burgdorferi (B. bg.), dotyczy od około 40% surowic pacjentów z podejrzeniem boreliozy z Lyme — włączając w to pacjentów z potwierdzonymi w wywiadzie incydentami pokąsania przez kleszcza i wystąpieniem objawu patognomonicznego, jakim jest rumień wędrujący (Erythema migrans)...
Abstrakt
Problem seronegatywności, jeśli chodzi o obecność swoistych przeciwciał dla Borrelia burgdorferi (B. bg.), dotyczy od około 40% surowic pacjentów z podejrzeniem boreliozy z Lyme — włączając w to pacjentów z potwierdzonymi w wywiadzie incydentami pokąsania przez kleszcza i wystąpieniem objawu patognomonicznego, jakim jest rumień wędrujący (Erythema migrans). Pomimo że dysponujemy szerokim wachlarzem testów bakteriologicznych, serologicznych czy molekularnych (PCR), diagnostyka boreliozy nastręcza wielu trudności i może prowadzić do uzyskiwania wyników zarówno fałszywie ujemnych, jak i fałszywie dodatnich. Przyczyn jest dużo i zostaną uwzględnione w niniejszej pracy. Praca dotyczy surowic seronegatywnych pod względem przeciwciał anty-B. bg. pacjentów, u których wolne przeciwciała anty-B. bg., prawdopodobnie związane przez antygeny bakteryjne, utworzyły krążące kompleksy immunologiczne (CIC). Celem pracy była analiza CIC pod kątem obecności przeciwciał przeciwko B. bg. w surowicach pacjentów trudnych diagnostycznie, u których obraz kliniczny wskazywał na zakażenie krętkiem z rodzaju B. bg. Badania przeprowadzono na surowicach od 107-osobowej grupy pacjentów z podejrzeniem boreliozy. Zastosowano nową metodycznie analizę obecności swoistych przeciwciał dla B. bg. Polega ona na wytrącaniu i dysocjacji CIC, a następnie oznaczaniu w uzyskanej frakcji y przeciwciał swoistych dla B. bg. W 74 surowicach (ze 107 badanych), ujemnych w teście ELISA, wykryto metodą Western- -blotting we frakcji g aż w 82% obecność przeciwciał swoistych dla B. bg. Najczęściej wykrywano przeciwciała dla antygenów: VIsE, p100, p41, p39, OspC i p18, co oznacza, że wyniki uzyskane powszechnie stosowaną metodą ELISA należy uważać za fałszywie ujemne i dlatego konieczne jest oznaczanie przeciwciał dla B. bg. także we frakcji CIC. Autorzy mają nadzieję, że opracowane przez nich nowe podejście, po niezbędnych dla celów rutynowej diagnostyki uproszczeniach, znajdzie zastosowanie w serodiagnostyce boreliozy i w sposób znaczący zmniejszy liczbę wyników fałszywie ujemnych.
Forum Medycyny Rodzinnej 2011, tom 5, nr 3, 201–209

The question of seronegativity, if cosider the presence of specific to B. bg antibodies, concerns about 40% sera of the patients with suspected borreliosis of Lyme — including patients with confirmed by anamnesis incidents of the thick bite and apperrance of the patognomonic manifestation migrating erythema (erythema migrans). Beside, that we have got a plenty methods to dispose — the hacteriological, serological or molecular (PCR) tests, diagnostic of Lyme borreliosis is still the source of many problems and may lead to even false-negative results, and also false-positive results. There is a plenty of reason for that and they will be taken under consideration in the introduction part. Presented paper raise the problem of seronegative sera regarding antibodies to B. bg, where free antibodies have been probably bound to bacterial antigens, forming circulating immune coplexes (CIC). The goal of the researches was analysis composition of CIC, regarding the presence of antibodies to B. bg in sera of patients difficult to diagnosis, where the clinical syndroms strongly sugested the infection with B.bg. spirochaetae. The researches cover group of 107 patients sera with suspected borreliosis. The new methodological approach to analysis of the specific to B. bg antibodies was applied. This method based on precipitation and dissociation of CIC, and next an estimation in so prepared g fraction specific for B. bg. antibodies. In 74 sera (from 107 tested), negative in the ELISA test, in 82% of the g fraction specific antibodies to B.bg. was estimated with using a Western-blott tests. The most frequently asessed antibodies were directed to antigens: VisE, p100, p41, p39, OspC and p18, what lead to consideration, that results we have got, with using ELISA method, should be considered as a false-negative and because of that is necessary to estimate antibodies to B. bg. also in CIC fraction. Authors can hope, that worked out a new methodological approach, after necessary for routine diagnostic simplification, will be usefull in sero-diagnostics of borreliosis and in a significant way dimnishes the amount of false-negative results.